Vitrificación

El método Cryotop® ofrece los mejores resultados probados del mercado para la vitrificación de ovocitos y embriones. El Cryotop®, los medios de vitrificación y descongelación y sus accesorios permiten que nuestro método se aplique de la manera más eficiente para lograr las tasas de supervivencia más altas.

La vitrificación ha revolucionado la práctica de la medicina reproductiva y hoy en día la criopreservación es parte integral de la metodología y tecnología actuales de la reproducción asistida.

En las últimas dos décadas, la congelación lenta ha sido reemplazada en todo el mundo por la vitrificación, debido a su asociación con mejores tasas de supervivencia y resultados clínicos comparables a las transferencias de embriones frescos.

Desde la introducción de la vitrificación, el número de ciclos de embriones congelados ha aumentado continuamente en todo el mundo, contribuyendo en evitar complicaciones para la paciente como el síndrome de hiperestimulación ovárica o embarazos múltiples.

Kitazato es una de las marcas reconocidas como pioneras en impulsar y mejorar la vitrificación.
Su mayor contribución en este campo ha sido el desarrollo del reconocido Método Cryotop®.

El método Cryotop® de Kitazato permite trabajar con ovocitos y embriones en todas las etapas del desarrollo, de pronúcleo a blastocisto.




Entrevista a la Dra. Ana Cobo: De qué manera la vitrificación ha cambiado su forma de trabajar en la clínica.

En esta entrevista la Dra. Ana Cobo, directora de la Unidad de Criobiología y Criopreservación de la Clínica IVI Valencia, nos cuenta de qué manera la vitrificación ha cambiado su forma de trabajar en la clínica.

Su versatilidad hace que el método Cryotop® de Kitazato sea el único que se pueda utilizar, de manera altamente eficiente, para numerosos procedimientos de criopreservación.

VITRIFICACIÓN DE EMBRIONES

Embriones Excedentes

Cuando se introdujo por primera vez la FIV, la transferencia de embriones frescos era la norma. Sin embargo, para evitar el riesgo de embarazos múltiples y prevenir el desperdicio de embriones excedentes, la criopreservación se ha ido convirtiendo en una parte esencial de la medicina reproductiva.

Segmentación del Ciclo

La hiperestimulación ovárica es una de las complicaciones de la medicina reproductiva que la vitrificación ha contribuido a minimizar. Un «freeze all» planificado de todos los embriones de un ciclo en fresco y su posterior transferencia en un ciclo de embriones congelados, contribuye a disminuir el riesgo de hiperestimulación ovárica, permitiendo que los niveles hormonales en el cuerpo de las pacientes vuelvan a la normalidad antes de la transferencia.

‘Freeze All’

El objetivo de la técnica «freeze all» es transferir los embriones a un entorno intrauterino más favorable, sin los posibles efectos adversos que determinados niveles hormonales pueden tener sobre la receptividad endometrial. Estudios muestran un aumento sustancial en la tasa de embarazo en ciclos con embriones congelados respecto a transferencias en fresco.

PGT

El Test Genético Preimplantacional analiza un embrión para detectar eventuales trastornos cromosómicos o monogénicos específicos antes de la transferencia embrionaria. Esto requiere una biopsia del embrión en día 3 o día 5. Una vitrificación exitosa es esencial durante un PGT para poder congelar todos los embriones ya biopsiados el tiempo suficiente hasta obtener el resultado de la prueba genética.

Acumulación de Embriones

En pacientes con baja respuesta ovárica, los embriones de 2 o 3 ciclos se acumulan para obtener blastocistos suficientes para ser, o bien transferidos, o bien analizados mediante PGT.

VITRIFICACIÓN DE OVOCITOS

Preservación de la Fertilidad
por Motivos Médicos

La quimioterapia y la radioterapia son generalmente gonadotóxicas y pueden provocar una insuficiencia ovárica prematura. Mujeres jóvenes con un diagnóstico temprano de cáncer pueden preservar su fertilidad mediante la congelación de ovocitos. Por otro lado, portadoras de BRCA-1 y BRCA-2 que requieren ooforectomía profiláctica, pacientes con trastornos autoinmunitarios y mujeres propensas a insuficiencia ovárica prematura podrían también ser candidatas para la congelación de ovocitos.

Preservación de la Fertilidad
por Motivos Sociales

La congelación de ovocitos es una opción viable para las mujeres que desean retrasar el embarazo por motivos profesionales o personales, antes de que su reloj biológico comience a agotarse. Dado que la tasa de abortos espontáneos aumenta después de los 30 años de edad, la congelación de ovocitos puede dar a una mujer la posibilidad de tener su propio hijo genéticamente sano cuando esté preparada para ello.

Preservación de la Fertilidad
por Razones Éticas

En algunos países, la vitrificación de embriones está prohibida. En tales circunstancias, la vitrificación de ovocitos es una opción viable en lugar de descartar los embriones excedentes.

Falta de Recuperación de Espermatozoides

En aquellos casos en que no se recuperen espermatozoides el día de la punción ovárica, los ovocitos se pueden vitrificar y descongelar en una fecha posterior cuando se consiga obtener una muestra de esperma, o se puedan recuperar los espermatozoides mediante una biopsia testicular posterior.

Programa de Donación de Ovocitos
Banco de Óvulos

Los bancos de ovocitos eliminan la necesidad de sincronización entre la donante y la receptora y, por lo tanto, reduce la ansiedad de las pacientes. También ayudan a brindar a la receptora opciones más amplias para seleccionar una donante sin comprometer los resultados del embarazo.

Acumulación de Ovocitos
en Pacientes con Baja Respuesta

En pacientes con baja respuesta a la estimulación ovárica, se pueden recolectar y vitrificar ovocitos de múltiples ciclos de estimulación. Una vez que se haya alcanzado un número adecuado de ovocitos, se puede realizar una ICSI para obtener un número adecuado de embriones, dando mejores tasas de embarazo.

Los ovocitos se pueden vitrificar para preservar la fertilidad en pacientes que deseen posponer su maternidad o por otro tipo de indicación médica. Además, también se pueden vitrificar y almacenar ovocitos de donantes para proporcionar una mejor sincronización con las receptoras.

Además, varios estudios demuestran que los embriones son capaces de mantener su potencial de implantación tras la vitrificación, permitiendo criopreservar los embriones excedentes de un ciclo, vitrificar todos los embriones para ciclos freeze-all o preservar los embriones sometidos a PGT hasta obtener el resultado genético.

Además, las criotransferencias de embriones vitrificados obtenidos a partir de ovocitos vitrificados previamente, confirman la capacidad que tienen estos embriones de sostener un proceso de vitrificación adicional y convertirse en recién nacidos sanos. En aquellos casos de PGT en los que se requiera una biopsia adicional y, por lo tanto, una revitrificación, también se demuestra que la doble vitrificación no tiene impacto en las tasas de parto.

(1) Cobo A. et al. Resultado de la criotransferencia de embriones obtenidos a partir de ovocitos vitrificados: la doble vitrificación no tiene impacto en las tasas de parto. http://dx.doi.org/10.1016/j.fertnstert.2013.01.106

Las células y la solución líquida a su alrededor se convierten en un sólido amorfo similar al vidrio, libre de cualquier estructura cristalina cuando se sumergen en nitrógeno líquido (LN).

 

La vitrificación requiere altas concentraciones de agentes crioprotectores (CPA) y una tasa de enfriamiento muy alta para producir el estado vítreo, sin embargo, también es crucial una alta tasa de calentamiento, ya que la supervivencia final de las células criopreservadas puede depender más de la tasa de calentamiento de la muestra que de la tasa de enfriamiento.

Antes de sumergirlos en la LN, los ovocitos o embriones se exponen a una solución CPA no vitrificante (ES – Equilibration Solution), que contiene sólo CPA permeables que penetran en las células, y después a una solución CPA vitrificante (VS – Vitrification Solution), que contiene CPAs permeables y no permeables.

Tras la exposición a los CPA no vitrificantes, la célula ajusta inmediatamente su osmolaridad perdiendo agua y se encoge.

Los CPAs entran entonces en la célula más lentamente, debido a la baja permeabilidad de su membrana.

El tiempo de exposición a las soluciones no vitrificantes a una temperatura definida es de vital importancia, ya que determina la concentración intracelular de CPA.

La solución vitrificante provoca una mayor deshidratación celular, que concentra el CPA intracelular.

El objetivo general es crear un entorno intracelular más estable que permanezca vitrificado.

El movimiento de agua y CPA a través de las membranas celulares es crucial para la supervivencia de las células durante la criopreservación, y el grado de permeabilidad depende de la etapa de desarrollo.

Los ovocitos tienen una baja relación superficie/volumen y una baja permeabilidad al CPA, por lo que son menos eficientes que los embriones en la pérdida de agua y en la absorción de CPA y, por tanto, son más susceptibles a la formación de hielo intracelular. La adición gradual de CPA durante la fase de equilibrio permite una permeabilidad adecuada en los ovocitos y garantiza un mejor resultado de supervivencia.

La permeabilidad de las membranas celulares también puede variar en función de la temperatura durante los procesos de vitrificación y desvitrificación, por lo que esta debe considerarse como un factor clave para un correcto intercambio de CPA y agua.

Tanto la adición como la eliminación de CPA provocan fases sucesivas de contracción y reexpansión debido al movimiento de agua y CPA a través de las membranas celulares.

El protocolo de Kitazato está diseñado para inducir con éxito un menor estrés de contracción-expansión a la célula durante los procedimientos.

El movimiento de agua y CPA a través de las membranas celulares es crucial para la supervivencia de las células durante la criopreservación, y el grado de permeabilidad depende de la etapa de desarrollo.

Los ovocitos tienen una baja relación superficie/volumen y una baja permeabilidad al CPA, por lo que son menos eficientes que los embriones en la pérdida de agua y en la absorción de CPA y, por tanto, son más susceptibles a la formación de hielo intracelular. La adición gradual de CPA durante la fase de equilibrio permite una permeabilidad adecuada en los ovocitos y garantiza un mejor resultado de supervivencia.

La permeabilidad de las membranas celulares también puede variar en función de la temperatura durante los procesos de vitrificación y desvitrificación, por lo que esta debe considerarse como un factor clave para un correcto intercambio de CPA y agua.

Tanto la adición como la eliminación de CPA provocan fases sucesivas de contracción y reexpansión debido al movimiento de agua y CPA a través de las membranas celulares.

El protocolo de Kitazato está diseñado para inducir con éxito un menor estrés de contracción-expansión a la célula durante los procedimientos.

Procedimiento de vitrificación

 

La Repro Plate es una placa de seis pocillos de forma cónica, diseñada exclusivamente para realizar el Método Cryotop® y la vitrificación con comodidad. La Repro Plate tiene alta transparencia y gran visibilidad, y también ofrece dos ranuras para apoyar el Cryotop®, permitiendo la carga de especímenes de forma estática a aquellos que deseen llevarla a cabo.

Cada pocillo debe llenarse con 300µl de solución, esto permite utilizar el volumen adecuado de medio para minimizar la evaporación del agua y el cambio de osmolalidad, y así evitar la disrupción celular. Además, la forma cónica de los pocillos de la Repro Plate permite la adición gradual y escalonada de las soluciones durante la vitrificación de los ovocitos, que es el método preferido y recomendado para esta etapa del desarrollo (2). Tiene una base plana, que permite el uso de etiquetas de trazabilidad.

 

Los ovocitos y embriones se exponen a las soluciones con concentraciones crecientes de agentes crioprotectores (CPA). Los CPA sustituirán el agua intracelular y evitarán la formación de cristales de hielo durante la transición al estado vítreo.

Las muestras se cargan en el Cryotop® y se transfieren al LN a una velocidad de enfriamiento muy alta. El Cryotop® es un dispositivo de volumen mínimo y de sistema abierto, ya que entra en contacto directo con el LN durante la vitrificación y el almacenamiento.

Las muestras vitrificadas pueden almacenarse con seguridad en LN o en fase de vapor de nitrógeno durante un periodo de tiempo muy largo.

(2) Reunión de consenso de Alpha sobre indicadores clave de rendimiento y puntos de referencia de la criopreservación: actas de una reunión de expertos. Reprod BioMed Online. 2012 Aug, 25 (2): 146-167.

Medios de Vitrificación Kitazato

Los medios de vitrificación Kitazato han evolucionado sustituyendo la HSA (albúmina de suero humano) por la HPC (hidroxipropilcelulosa), eliminando así el posible riesgo de transmisión de patógenos a partir de productos sanguíneos. Además, se ha demostrado que la suplementación con HPC en combinación con trehalosa tiene determinadas ventajas (3). La HPC confiere una mayor viscosidad a las soluciones, lo que aumenta la probabilidad de una vitrificación exitosa y, por tanto, de obtener una mejor supervivencia y un mayor desarrollo embrionario. Además, el HPC permite que los especímenes se desprendan fácilmente del Cryotop durante el calentamiento, reduciendo el estrés mecánico y aumentando las tasas de supervivencia incluso en los blastocistos eclosionados.

Los medios de vitrificación de Kitazato contienen DMSO y EG como crioprotectores permeables y trehalosa como crioprotector no permeable. La combinación de DMSO y EG en nuestros medios de vitrificación evita el exceso de toxicidad celular y reduce la presión osmótica que puede dañar los ovocitos y embriones durante la deshidratación.

(3) Coello A. et al. Una combinación de hidroxipropilcelulosa y trehalosa como suplemento para la vitrificación de ovocitos humanos: un estudio retrospectivo sobre cohorte. J Assist Reprod Genet. 2016 Mar, 33(3): 413-421.

Para el procedimiento de desvitrificación, la Repro Plate se prepara con Medio de Desvitrificación.

El Cryotop se sumerge en la primera solución de calentamiento precalentada a 37ºC consiguiendo una velocidad de calentamiento muy alta. Los ovocitos y embriones se exponen a diferentes soluciones con una disminución gradual de la concentración de CPA, lo que evita el choque osmótico y permite una rehidratación celular buena y segura.

El crioprotector no permeable de los Medios de Desvitrificación Kitazato es la trehalosa, que tiene una mayor capacidad para proteger las membranas celulares en comparación con la sacarosa. Ya que las células tienen una tolerancia limitada a la contracción y reexpansión, el protocolo de rehidratación debe garantizar un número mínimo de contracciones y reexpansión del citoplasma para no alterar el funcionamiento celular.

Para el procedimiento de desvitrificación, la Repro Plate se prepara con Medio de Desvitrificación.

El Cryotop se sumerge en la primera solución de calentamiento precalentada a 37ºC consiguiendo una velocidad de calentamiento muy alta. Los ovocitos y embriones se exponen a diferentes soluciones con una disminución gradual de la concentración de CPA, lo que evita el choque osmótico y permite una rehidratación celular buena y segura.

El crioprotector no permeable de los Medios de Desvitrificación Kitazato es la trehalosa, que tiene una mayor capacidad para proteger las membranas celulares en comparación con la sacarosa. Ya que las células tienen una tolerancia limitada a la contracción y reexpansión, el protocolo de rehidratación debe garantizar un número mínimo de contracciones y reexpansión del citoplasma para no alterar el funcionamiento celular.

IVF Lifecycle

Kitazato ofrece una amplia selección de productos de calidad que maximizan el éxito en cada paso del ciclo de FIV. Obtén más información sobre los productos específicos en cada procedimiento de FIV.

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