Antes de sumergirlos en la LN, los ovocitos o embriones se exponen a una solución CPA no vitrificante (ES – Equilibration Solution), que contiene sólo CPA permeables que penetran en las células, y después a una solución CPA vitrificante (VS – Vitrification Solution), que contiene CPAs permeables y no permeables.
Tras la exposición a los CPA no vitrificantes, la célula ajusta inmediatamente su osmolaridad perdiendo agua y se encoge.
Los CPAs entran entonces en la célula más lentamente, debido a la baja permeabilidad de su membrana.
El tiempo de exposición a las soluciones no vitrificantes a una temperatura definida es de vital importancia, ya que determina la concentración intracelular de CPA.
La solución vitrificante provoca una mayor deshidratación celular, que concentra el CPA intracelular.
El objetivo general es crear un entorno intracelular más estable que permanezca vitrificado.